文章编号：猫神经节细胞高尔基体的固定与染色法柳建平（重庆师范大学生命科学学院生化与分子生物学教研室，重庆400047目的介绍动物高尔基复合体（GolgiComplex）切片制作的改进技术。方法选用猫颈椎脊神经节为材料，以氯化镉为固定剂，适量增加染色剂的用量，减少还原剂的用量，按常规方法制成永久装片。结果光镜下可清楚地观察到弯曲的线状、点状棕褐色的高尔基体。结论采用本方法制作高尔基体切片，取材容易，时间短，无污染、不需复染，在光镜下能清楚地观察各种形态的高尔基体。关健词：猫神经节；石蜡切片；高尔基体；银染中图法分类：文献标识码：高尔基体复合体（GolgiComplex）是真核细胞内分泌途径中最重要的细胞器，是细胞物质加工的转运站[1，2]物学制片中，高尔基体切片的制作是实验教学中的一项重要的基本技术。传统的高尔基体切片制作法多以兔脊神经节为材料，并按常规方法制成永久装片。我们在实践过程中通过不断摸索、总结经验，对传统的制作技术进行了改进，选择无污染的固定剂，同时对染色剂和还原剂的用量作了适当调整，取得了良好效果。材料与方法1.1材料取健康猫一只(猫龄3岁左右，雌雄均可，体重3-4kg，重庆医科大学动物饲养中心提供)，浸入水中溺死。

立即用骨剪打开颈椎前节，在椎管内缘外侧找到米粒大小的突胞即神经节，用眼科镊夹于神经,迅速剪下脊神经节。1.2方法1.2.1固定液的配制取氯化镉1g，中性福尔马林15ml，溶于85ml蒸馏基金项目：重庆市自然科学基金项目（2007BB1227）SupportedNaturalScienceFoundationProjectCQCSTC2007BB1227)作者简介：柳建平，（1954-），男.重庆市人.汉.实验师，主要从事实验技术和教E-mail:liujianping54@126收稿日期：2008-10-31；修回日期：2008-11-12水备用。1.2.2固定将剪下的神经节迅速投入已配制好的固定液中固定1.2.3冲洗将固定好的神经节快速用蒸馏水冲洗3将冲洗干净的神经节组织迅速浸入到2%硝酸银溶液恒温箱中避光染色20h，染色结束立即用蒸馏水快速冲洗31.2.5还原液的配制：取对苯二酚（Hydroquinone）1.5g，中性福尔马林20ml，无水亚硫酸钠0.2g，100ml蒸馏水。1.2.6还原处理：染色冲洗干净的颈椎神经节组织浸入到还原液中8-10h，中间更换次新液，直到组织块在还原液中逐渐变成棕色至深棕色为止。

1.2.7切片按常规方法，经脱水透明石蜡包埋脱蜡封片（加拿大树胶）。结果将制作好的装片，采用NikonE200显微镜观察，神经细胞界限明显，细胞核呈空泡状，周围细胞质被染成金黄色，细胞质中有许多染成棕褐色卷曲的线状、颗粒状、或不规则网状结构的高尔基体，显示清晰，对比明显（图1）。讨论本实验参照张泽林等制作高尔基体切片的方法,在实践过程中,我们对实验动物及固定剂的选择,染色剂、还原剂的用量及各环节所需要的时间进行了筛选和改进。我们认为，本方法取材容易,简单易行，以氯化镉为固定剂，较硝酸铀具有毒性小、无污染、无放射性等优点本方法固定时间仅需5h。银染过程有学者介绍以0.75-1.5%的硝酸银染色效果好[3，6]，我们在实践中将硝酸银的浓度提2%后，染色时间20h，效果更佳。此外，还原剂无水亚硫酸钠用量可减少至0.2克，材料还原8-10h，中间更换一次新液还原效果更佳。本实验方法制作的高尔基体的切片，蜡块组织固定、透明度好，不需复染。在光镜下组织细胞层次分明,切面完整，能清楚地观察到高尔基体的多种形态（图1），并可长久保存，不易褪色。采用本方法制作高尔基体石蜡切片，具有操作简便、省时，且具有较好的重复性和稳定性，实验过程不需要特殊的仪器设备等优点，制作的切片对比明显，能充分地显示高尔基体复合体的多种形态。

致谢：本实验得到重庆师范大学生命科学学院细胞生物学及遗传学教研室蔡志华副教授悉心指导，并受到重庆医科大学人体形态实验室周宇箭实验师的大力协助。特此致谢！参考文献：高尔基体的结构与功能研究简介[J].生物学通报,2006，内质网和高尔基体的功能浅析[J].生物学通报,2006,41(1):22.高尔基体的取材与染色及其制片[J].生物学杂志,2002,19(5):42.北京:人民教育出版社，1981:67-70.铀对人体影响的机制及防治[J].国外医学:卫生学分册,2004,31(2):80-84.蔡美丽.高尔基复合体镀银染色法探讨[J].解剖学杂志,2003,26(5):483.猫颈椎神经节石蜡切片（NikonE200，400）高尔基体